普朗醫(yī)療器械公司1月5日訊   血管內(nèi)皮細胞生長因子是在胚胎發(fā)生和創(chuàng)傷愈合過程中啟動血管形成的一個高度特異的有絲分裂原，VEGF是胱氨酸生長因子超家族的一員，主要由垂體中濾泡星形細胞產(chǎn)生，能誘導血管生成，其作用沒有種屬特異性。血管內(nèi)皮細胞可作為檢測VEGF促細胞增殖實驗的靶細胞。外周皮膚組織受損后數(shù)小時，即可在損傷局部檢測到VEGF mRNA和蛋白水平升高，由于血管內(nèi)皮細胞的過度增殖在許多種疾病的發(fā)病機制中可能具有重要作用，VEGF這種內(nèi)皮細胞高度特異性生長因子，也因此而受到重視。實驗室中通過全自動血液細胞分析儀對標本的收集與保存條件對檢測結(jié)果有較大的影響，收集標本前必須清楚要檢測的成分是否足夠穩(wěn)定。現(xiàn)就不同的標本收集與保存條件做實驗對照，加以觀察。

        1 材料與方法

        1.1 材料

        1.1.1 試劑

        血管內(nèi)皮細胞檢測試劑盒由美國ADL（Adlitteram Diagnostic Laboratories,Inc）公司生產(chǎn)。

        1.1.2 儀器

        Opsys MR酶標儀由深圳晶美生物工程有限公司(上海)生產(chǎn)；Opsys MW洗板機由深圳晶美生物工程有限公司(上海)生產(chǎn)；AMERICA 低溫冷柜武漢產(chǎn)；YANGZI低溫冰箱滁州產(chǎn)。

        1.2 方法

        1.2.1 實驗原理

        用純化的抗體包被微孔板，制成固相載體，向包被抗VEGF抗體的微孔中依次加入標本或標準品、生物素化的抗VEGF抗體、HRP標記的親和素，經(jīng)過徹底洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的VEGF呈正相關(guān)。用酶標儀在450 nm波長下測定吸光度（OD值），計算樣品濃度。

        1.2.2 操作步驟

        按試劑說明書要求進行。為了保證實驗結(jié)果的準確性，底物反應時間后應盡快加入終止液，終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同，用酶標儀在450 nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）。

        1.2.3 檢測方法

        取新鮮待測標本6份，分別檢測其血清中血管內(nèi)皮細胞生長因子含量，并將每份標本分別分成4份，使其中1份紅細胞破壞溶血，成為溶血標本，檢測溶血標本的VEGF含量。另3份分別置于2～8℃、-20℃、-70℃不同的保存環(huán)境中，于2 d、30 d，180 d分別檢測VEGF的含量，記錄OD值。

        1.2.4 統(tǒng)計學方法

        統(tǒng)計學處理采用SPSS 13.0軟件完成，兩樣本的比較采用t檢驗。

        2 結(jié)果

        通過觀察可見，標本在2～8℃環(huán)境條件下可保存2 d，-20℃條件下可保存30 d，-70℃條件下可保存180 d。溶血標本可使OD值顯著增高，出現(xiàn)假陽性，因此在標本留取和保存過程中應避免溶血（見表1）。表1 不同條件下VEGF檢驗結(jié)果比較（略）

        3 討論

        研究表明，VEGF在動物機體生長發(fā)育中起著極其重要的作用［1,4］。VEGF的主要作用在于調(diào)節(jié)血管發(fā)生和血管形成，這主要體現(xiàn)在VEGF對血管內(nèi)皮細胞的促進分裂增生和趨化作用。除此之外，VEGF對單核細胞也有趨化作用。目前研究認為［2］，血管發(fā)生過程對于腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移起著至關(guān)重要的作用。由于VEGF這種血管內(nèi)皮細胞特異性生長因子在血管發(fā)生中起著重要的調(diào)節(jié)作用，因此，VEGF受體與腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移也存在著密切的關(guān)系。腫瘤組織內(nèi)的血管內(nèi)皮細胞表達VEGF受體明顯高于正常內(nèi)皮細胞，血管內(nèi)皮生長因子及其受體的表達可作為患者預后的指標之一［3］。在急性心肌梗死患者，血清VEGF明顯增高，比心絞痛和陳舊性心肌梗死者明顯增高，表明血清VEGF濃度可反映心血管缺血程度［5］。此外，在一些血管發(fā)生異常過度的疾病，如糖尿病性視網(wǎng)膜病變及其他增生性視網(wǎng)膜病變、類風濕性關(guān)節(jié)炎、銀屑病、接觸性皮炎等病變組織局部也可檢測到VEGF和VEGF受體mRNA水平升高。鑒于此，血管內(nèi)皮生長因子檢測越來越受到臨床對疾病診療的重視，實驗室標本的收集與保存條件對檢測結(jié)果有較大的影響，收集標本前必須清楚要檢測的成分是否穩(wěn)定。從實驗結(jié)果可知，標本在2～8℃環(huán)境條件下可保存2 d，-20℃條件下可保存30 d，-70℃條件下可保存180 d，溶血標本可使OD值顯著增高，出現(xiàn)假陽性，因此在標本留取和保存過程中應避免造成溶血。對收集后當天進行檢測的標本，可儲存在4℃備用，如有特殊原因需要周期收集標本，將標本及時分裝后放在-20℃或-70℃條件下保存，且應避免反復凍融，以期取得較好的檢測結(jié)果。