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如何設(shè)置全自動(dòng)生化分析儀的參數(shù)
如何設(shè)置全自動(dòng)生化分析儀的參數(shù)
加入時(shí)間：2012-01-09 09:55:52 當(dāng)前新聞點(diǎn)擊率：32767
由醫(yī)療器械公司研發(fā)并生產(chǎn)的全自動(dòng)生化分析儀常見(jiàn)的分析方法有：終點(diǎn)分析法、連續(xù)監(jiān)測(cè)法、比濁測(cè)定法。
1.1 終點(diǎn)分析法
1.1.1 一點(diǎn)終點(diǎn)法
該法的特點(diǎn)是使用一種或兩種試劑，待測(cè)定物與試劑反應(yīng)達(dá)到終點(diǎn)時(shí)，測(cè)定吸光度，計(jì)算待測(cè)物的濃度。該法常見(jiàn)的有總蛋白雙縮脲法、白蛋白溴甲酚綠法、葡萄糖氧化酶法。
1.1.2 兩點(diǎn)終點(diǎn)法
也稱(chēng)固定時(shí)間法。在單試劑分析中，該法可以消除樣品以及試劑的顏色、濁度的干擾，其原理是在樣品與試劑混合后的延滯期后讀取一個(gè)點(diǎn)A1，一定時(shí)間后讀取A2，ΔA=A2-A1，然后比較標(biāo)準(zhǔn)和測(cè)定的ΔA值，求得待測(cè)物的濃度。單試劑分析常見(jiàn)的有肌酐苦味酸法。在雙試劑分析中，該法還具有消除內(nèi)源性物質(zhì)測(cè)定的干擾，其原理是加入試劑1后讀取A1，加入試劑2后讀取A2，A1相當(dāng)于讀出樣品空白值，A2才是實(shí)際呈色反應(yīng)，因此ΔA=A2-A1。
1.2 連續(xù)監(jiān)測(cè)法
其原理是在酶促反應(yīng)的最適條件下，用物理、化學(xué)或酶促反應(yīng)的分析方法，在反應(yīng)速度恒定期（零級(jí)反應(yīng)期）來(lái)連續(xù)觀察和記錄一定反應(yīng)時(shí)間內(nèi)底物或產(chǎn)物量的變化，以單位時(shí)間酶反應(yīng)初速度計(jì)算出酶活力的大小和代謝物的濃度。其具體方法有兩點(diǎn)速率法和多點(diǎn)速率法。
1.2.1 兩點(diǎn)速率法
觀察在零級(jí)反應(yīng)期內(nèi)兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)的吸光度，用兩個(gè)點(diǎn)的吸光度的差值（ΔA）除以時(shí)間（分），計(jì)算出每分鐘的吸光度變化值。
1.2.2 多點(diǎn)速率法
在酶促反應(yīng)進(jìn)程的零級(jí)反應(yīng)期內(nèi)每隔一定時(shí)間（2-30s)進(jìn)行一次監(jiān)測(cè)，連續(xù)監(jiān)測(cè)多次，求出單位時(shí)間內(nèi)的反應(yīng)速度。
1.3 比濁測(cè)定法
自動(dòng)化生化分析儀一般只能做透射比濁分析，其原理是在光源的光路方向測(cè)量透過(guò)光強(qiáng)度，它常用于終點(diǎn)法測(cè)定，目前應(yīng)用較多的為免疫透射比濁法。目前主要用于血清特種蛋白的檢測(cè)，如載脂蛋白、微量蛋白、急性時(shí)相反應(yīng)蛋白、免疫球蛋白以及某些藥物監(jiān)測(cè)等。
2. 溫度
一般生化分析儀的恒溫控制器可以對(duì)25℃、30℃、37℃三種溫度進(jìn)行恒溫，根據(jù)需要可以任意選擇。由于酶在達(dá)到最適溫度以前，溫度每升高10℃，反應(yīng)速率增加1-2倍，因此IFCC推薦酶測(cè)定時(shí)的溫度設(shè)置為37℃。
3.波長(zhǎng)
3.1 單波長(zhǎng)
當(dāng)測(cè)定體系中含有一種組分或在混合溶液中待測(cè)組分的吸收峰與其他共存物質(zhì)的吸收波長(zhǎng)無(wú)重疊時(shí)，可選用。如果一個(gè)物質(zhì)有幾個(gè)吸收峰，可選用吸光度最大的一個(gè)波長(zhǎng)，或者選擇在吸收峰處吸光度隨波長(zhǎng)變化較少的某個(gè)波長(zhǎng)。
3.2 雙波長(zhǎng)
當(dāng)被檢溶液混濁或存在較多的干擾物質(zhì)時(shí)，測(cè)定時(shí)會(huì)出現(xiàn)光散射和非特異性光吸收，從而影響測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性，此時(shí)可用雙波長(zhǎng)測(cè)定，以提高測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性，而在實(shí)際應(yīng)用中選擇輔助波長(zhǎng)主要用于消除脂血、溶血、黃疸的干擾。由于脂質(zhì)、血紅蛋白、膽紅素在較寬的波長(zhǎng)范圍內(nèi)有較強(qiáng)的光吸收，常常同測(cè)定波長(zhǎng)有重疊，此時(shí)測(cè)得的吸光度包含待測(cè)物質(zhì)的吸光度和干擾物質(zhì)的吸光度，因此選用合適的輔助波長(zhǎng)可以消除干擾物質(zhì)的吸光度。輔助波長(zhǎng)的設(shè)置原則是根據(jù)測(cè)定波長(zhǎng)選擇輔助波長(zhǎng)，要求干擾物質(zhì)在測(cè)定波長(zhǎng)同輔助波長(zhǎng)有相同的吸光度。
4. 樣品量和試劑量
樣品和試劑量的設(shè)置原則一般是根據(jù)試劑說(shuō)明書(shū)上的比例，并結(jié)合儀器的特性進(jìn)行設(shè)置。儀器的特性包括：樣品和試劑的最小加樣量及加量范圍、最小反應(yīng)液的體積等。在實(shí)際工作中為節(jié)約成本可以根據(jù)比例縮小樣品和試劑用量，但同時(shí)必須滿足最小反應(yīng)液總量。但值得注意的是，樣品量不應(yīng)少于3μl，否則測(cè)試結(jié)果的重復(fù)性差。
