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如何設(shè)置全自動生化分析儀的參數(shù)
如何設(shè)置全自動生化分析儀的參數(shù)
加入時(shí)間：2012-01-09 09:55:52 當(dāng)前新聞點(diǎn)擊率：32767
由醫(yī)療器械公司研發(fā)并生產(chǎn)的全自動生化分析儀常見的分析方法有：終點(diǎn)分析法、連續(xù)監(jiān)測法、比濁測定法。
1.1 終點(diǎn)分析法
1.1.1 一點(diǎn)終點(diǎn)法
該法的特點(diǎn)是使用一種或兩種試劑，待測定物與試劑反應(yīng)達(dá)到終點(diǎn)時(shí)，測定吸光度，計(jì)算待測物的濃度。該法常見的有總蛋白雙縮脲法、白蛋白溴甲酚綠法、葡萄糖氧化酶法。
1.1.2 兩點(diǎn)終點(diǎn)法
也稱固定時(shí)間法。在單試劑分析中，該法可以消除樣品以及試劑的顏色、濁度的干擾，其原理是在樣品與試劑混合后的延滯期后讀取一個點(diǎn)A1，一定時(shí)間后讀取A2，ΔA=A2-A1，然后比較標(biāo)準(zhǔn)和測定的ΔA值，求得待測物的濃度。單試劑分析常見的有肌酐苦味酸法。在雙試劑分析中，該法還具有消除內(nèi)源性物質(zhì)測定的干擾，其原理是加入試劑1后讀取A1，加入試劑2后讀取A2，A1相當(dāng)于讀出樣品空白值，A2才是實(shí)際呈色反應(yīng)，因此ΔA=A2-A1。
1.2 連續(xù)監(jiān)測法
其原理是在酶促反應(yīng)的最適條件下，用物理、化學(xué)或酶促反應(yīng)的分析方法，在反應(yīng)速度恒定期（零級反應(yīng)期）來連續(xù)觀察和記錄一定反應(yīng)時(shí)間內(nèi)底物或產(chǎn)物量的變化，以單位時(shí)間酶反應(yīng)初速度計(jì)算出酶活力的大小和代謝物的濃度。其具體方法有兩點(diǎn)速率法和多點(diǎn)速率法。
1.2.1 兩點(diǎn)速率法
觀察在零級反應(yīng)期內(nèi)兩個時(shí)間點(diǎn)的吸光度，用兩個點(diǎn)的吸光度的差值（ΔA）除以時(shí)間（分），計(jì)算出每分鐘的吸光度變化值。
1.2.2 多點(diǎn)速率法
在酶促反應(yīng)進(jìn)程的零級反應(yīng)期內(nèi)每隔一定時(shí)間（2-30s)進(jìn)行一次監(jiān)測，連續(xù)監(jiān)測多次，求出單位時(shí)間內(nèi)的反應(yīng)速度。
1.3 比濁測定法
自動化生化分析儀一般只能做透射比濁分析，其原理是在光源的光路方向測量透過光強(qiáng)度，它常用于終點(diǎn)法測定，目前應(yīng)用較多的為免疫透射比濁法。目前主要用于血清特種蛋白的檢測，如載脂蛋白、微量蛋白、急性時(shí)相反應(yīng)蛋白、免疫球蛋白以及某些藥物監(jiān)測等。
2. 溫度
一般生化分析儀的恒溫控制器可以對25℃、30℃、37℃三種溫度進(jìn)行恒溫，根據(jù)需要可以任意選擇。由于酶在達(dá)到最適溫度以前，溫度每升高10℃，反應(yīng)速率增加1-2倍，因此IFCC推薦酶測定時(shí)的溫度設(shè)置為37℃。
3.波長
3.1 單波長
當(dāng)測定體系中含有一種組分或在混合溶液中待測組分的吸收峰與其他共存物質(zhì)的吸收波長無重疊時(shí)，可選用。如果一個物質(zhì)有幾個吸收峰，可選用吸光度最大的一個波長，或者選擇在吸收峰處吸光度隨波長變化較少的某個波長。
3.2 雙波長
當(dāng)被檢溶液混濁或存在較多的干擾物質(zhì)時(shí)，測定時(shí)會出現(xiàn)光散射和非特異性光吸收，從而影響測定結(jié)果的準(zhǔn)確性，此時(shí)可用雙波長測定，以提高測定結(jié)果的準(zhǔn)確性，而在實(shí)際應(yīng)用中選擇輔助波長主要用于消除脂血、溶血、黃疸的干擾。由于脂質(zhì)、血紅蛋白、膽紅素在較寬的波長范圍內(nèi)有較強(qiáng)的光吸收，常常同測定波長有重疊，此時(shí)測得的吸光度包含待測物質(zhì)的吸光度和干擾物質(zhì)的吸光度，因此選用合適的輔助波長可以消除干擾物質(zhì)的吸光度。輔助波長的設(shè)置原則是根據(jù)測定波長選擇輔助波長，要求干擾物質(zhì)在測定波長同輔助波長有相同的吸光度。
4. 樣品量和試劑量
樣品和試劑量的設(shè)置原則一般是根據(jù)試劑說明書上的比例，并結(jié)合儀器的特性進(jìn)行設(shè)置。儀器的特性包括：樣品和試劑的最小加樣量及加量范圍、最小反應(yīng)液的體積等。在實(shí)際工作中為節(jié)約成本可以根據(jù)比例縮小樣品和試劑用量，但同時(shí)必須滿足最小反應(yīng)液總量。但值得注意的是，樣品量不應(yīng)少于3μl，否則測試結(jié)果的重復(fù)性差。
