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總膽紅素(T-Bil)的檢驗方法
加入時間:2012-01-09 10:00:00  當(dāng)前新聞點擊率:32767

       人紅細胞的壽命一般為120 d,紅細胞死亡后變成間接膽紅素(I-Bil),經(jīng)肝臟轉(zhuǎn)化為直接膽紅素(D-Bil),組成膽汁,排入膽道,最后經(jīng)大便排出。間接膽紅素與直接膽紅素之和就是總膽紅素(T-Bil)。上述的任何一個環(huán)節(jié)出現(xiàn)障礙,均可使人發(fā)生溶血性黃疸、肝細胞性黃疸和阻塞性黃疸。肝炎患者的黃疸一般為肝細胞性黃疸,也就是說直接膽紅素與間接膽紅素均升高,而淤膽型肝炎的患者以直接膽紅素升高為主。總膽紅素的正常值為1.71~17.1 μmol/L(1~10 mg/L),直接膽紅素的正常值為1.71~7 μmol/L(1~4 mg/L)。因此,臨床上對于用測定血清總膽紅素來鑒別黃疸有較大意義,它對肝臟疾病診斷、治療和愈后判斷有重要價值。我們對總膽紅素試劑盒中試劑的線性和準(zhǔn)確性進行研究,不僅可以有效的節(jié)約原材料、降低生產(chǎn)成本、規(guī)范行業(yè),對臨床檢驗的準(zhǔn)確性,也大有幫助。

       實驗原理:

       重氮法:總膽紅素在二甲亞砜等加速劑作用下,在酸性溶液中與重氮苯磺酸作用生成紫色的偶氮膽紅素,與經(jīng)過同樣處理的標(biāo)準(zhǔn)液比較,即可計算出樣品中膽紅素的含量。

        試驗方法:

        線性關(guān)系取總膽紅素(T-Bil)高濃度樣本,通過采用樣品量加倍模式(高值血清低于線性范圍上限時)或用生理鹽水稀釋成一系列濃度,最高濃度應(yīng)大于或等于標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定線性范圍上限值(5個試劑盒的加樣量及加樣方法詳見表1~ 5),每個濃度重復(fù)測定2次,取其吸光度平均值與對應(yīng)的理論濃度值進行回歸分析,求相關(guān)系數(shù)r。

        準(zhǔn)確性取一定值血清(濃度為24.8 μmol/L的標(biāo)準(zhǔn)液),按線性項下各表中定標(biāo)的加樣方式和試驗步驟進行測定,重復(fù)3次,取其均值計算偏差。然后按以下公式計算各樣品的檢測誤差。

        誤差=( 測定值-24.81 /24.8)×100%

        結(jié)果:

        線性 將試劑盒各濃度吸光度均值與其對應(yīng)的理論濃度回歸,計算回歸系數(shù)r值,結(jié)果見表6。

        準(zhǔn)確性 檢測結(jié)果如表所示。(略)

        總膽紅素標(biāo)準(zhǔn)品很不穩(wěn)定,根據(jù)線性結(jié)果來看,雖然相關(guān)系數(shù)r很好,但吸光度所得值或全部升高或全部降低,即吸光度的增加與其相應(yīng)的理論濃度不呈正比關(guān)系。在有些標(biāo)準(zhǔn)中要求所得值與理論值的偏差應(yīng)≤10%,如按這一要求來判定線性,總膽紅素的線性就遠遠達不到要求,所以考慮到總膽紅素試劑盒這一特殊性,在標(biāo)準(zhǔn)中不但要求r值,同時還應(yīng)要求所得值與理論值的偏差。

  在分析方法學(xué)上,本次試驗采用的是一點定標(biāo)法。在做線性這一項目檢測時,由于總膽紅素試劑盒中說明書要求的試劑與標(biāo)準(zhǔn)液的比例較低,這就要求必須要用高濃度的標(biāo)準(zhǔn)液來定標(biāo)和做線性,但如果用高濃度的標(biāo)準(zhǔn)液定標(biāo)后,再做準(zhǔn)確性時,對準(zhǔn)確性的結(jié)果影響卻非常的大。如果在試驗中用高濃度的標(biāo)準(zhǔn)品定標(biāo)做線性,再用低濃度的標(biāo)準(zhǔn)液定標(biāo)做準(zhǔn)確性,這樣得出的結(jié)果雖好,但卻也失去了檢測的意義。對于很多診斷試劑來說,因為考慮到操作簡便,標(biāo)準(zhǔn)曲線法基本上是一個被淘汰了的方法。

  總膽紅素濃度在171 μmol/L以內(nèi)線性良好,高于此值時可用生理鹽水將血清稀釋后重測,結(jié)果乘以稀釋倍數(shù),且總膽紅素在10~37℃范圍內(nèi)測定不受溫度變化的影響,呈色在2 h內(nèi)非常穩(wěn)定。在實驗中雖然都用的是終點法且反應(yīng)原理一樣,但有些帶血清空白,有些又不用帶血清空白。因為在試驗前都是要清除試劑空白,血清空白對結(jié)果到底有怎樣的影響還值得研究。

  

   高敏C反應(yīng)蛋白檢測試劑盒生產(chǎn)廠家普朗醫(yī)療器械網(wǎng)編發(fā)表!,媒體間轉(zhuǎn)載請注明鏈接來源

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