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總膽紅素(T-Bil)的檢驗(yàn)方法
總膽紅素(T-Bil)的檢驗(yàn)方法
加入時(shí)間：2012-01-09 10:00:00 當(dāng)前新聞點(diǎn)擊率：32767
人紅細(xì)胞的壽命一般為120 d，紅細(xì)胞死亡后變成間接膽紅素（I-Bil），經(jīng)肝臟轉(zhuǎn)化為直接膽紅素（D-Bil），組成膽汁，排入膽道，最后經(jīng)大便排出。間接膽紅素與直接膽紅素之和就是總膽紅素（T-Bil）。上述的任何一個(gè)環(huán)節(jié)出現(xiàn)障礙，均可使人發(fā)生溶血性黃疸、肝細(xì)胞性黃疸和阻塞性黃疸。肝炎患者的黃疸一般為肝細(xì)胞性黃疸，也就是說(shuō)直接膽紅素與間接膽紅素均升高，而淤膽型肝炎的患者以直接膽紅素升高為主。總膽紅素的正常值為1.71～17.1 μmol/L(1～10 mg/L)，直接膽紅素的正常值為1.71～7 μmol/L(1～4 mg/L)。因此，臨床上對(duì)于用測(cè)定血清總膽紅素來(lái)鑒別黃疸有較大意義，它對(duì)肝臟疾病診斷、治療和愈后判斷有重要價(jià)值。我們對(duì)總膽紅素試劑盒中試劑的線性和準(zhǔn)確性進(jìn)行研究，不僅可以有效的節(jié)約原材料、降低生產(chǎn)成本、規(guī)范行業(yè)，對(duì)臨床檢驗(yàn)的準(zhǔn)確性，也大有幫助。 實(shí)驗(yàn)原理： 重氮法：總膽紅素在二甲亞砜等加速劑作用下，在酸性溶液中與重氮苯磺酸作用生成紫色的偶氮膽紅素，與經(jīng)過(guò)同樣處理的標(biāo)準(zhǔn)液比較，即可計(jì)算出樣品中膽紅素的含量。 試驗(yàn)方法： 線性關(guān)系取總膽紅素（T-Bil）高濃度樣本，通過(guò)采用樣品量加倍模式（高值血清低于線性范圍上限時(shí)）或用生理鹽水稀釋成一系列濃度，最高濃度應(yīng)大于或等于標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定線性范圍上限值（5個(gè)試劑盒的加樣量及加樣方法詳見(jiàn)表1~ 5），每個(gè)濃度重復(fù)測(cè)定2次，取其吸光度平均值與對(duì)應(yīng)的理論濃度值進(jìn)行回歸分析，求相關(guān)系數(shù)r。 準(zhǔn)確性取一定值血清（濃度為24.8 μmol/L的標(biāo)準(zhǔn)液），按線性項(xiàng)下各表中定標(biāo)的加樣方式和試驗(yàn)步驟進(jìn)行測(cè)定，重復(fù)3次，取其均值計(jì)算偏差。然后按以下公式計(jì)算各樣品的檢測(cè)誤差。 誤差=( 測(cè)定值-24.81 /24.8)×100% 結(jié)果： 線性 將試劑盒各濃度吸光度均值與其對(duì)應(yīng)的理論濃度回歸，計(jì)算回歸系數(shù)r值，結(jié)果見(jiàn)表6。 準(zhǔn)確性 檢測(cè)結(jié)果如表所示。（略） 總膽紅素標(biāo)準(zhǔn)品很不穩(wěn)定，根據(jù)線性結(jié)果來(lái)看，雖然相關(guān)系數(shù)r很好，但吸光度所得值或全部升高或全部降低，即吸光度的增加與其相應(yīng)的理論濃度不呈正比關(guān)系。在有些標(biāo)準(zhǔn)中要求所得值與理論值的偏差應(yīng)≤10%，如按這一要求來(lái)判定線性，總膽紅素的線性就遠(yuǎn)遠(yuǎn)達(dá)不到要求，所以考慮到總膽紅素試劑盒這一特殊性，在標(biāo)準(zhǔn)中不但要求r值，同時(shí)還應(yīng)要求所得值與理論值的偏差。 在分析方法學(xué)上，本次試驗(yàn)采用的是一點(diǎn)定標(biāo)法。在做線性這一項(xiàng)目檢測(cè)時(shí)，由于總膽紅素試劑盒中說(shuō)明書(shū)要求的試劑與標(biāo)準(zhǔn)液的比例較低，這就要求必須要用高濃度的標(biāo)準(zhǔn)液來(lái)定標(biāo)和做線性，但如果用高濃度的標(biāo)準(zhǔn)液定標(biāo)后，再做準(zhǔn)確性時(shí)，對(duì)準(zhǔn)確性的結(jié)果影響卻非常的大。如果在試驗(yàn)中用高濃度的標(biāo)準(zhǔn)品定標(biāo)做線性，再用低濃度的標(biāo)準(zhǔn)液定標(biāo)做準(zhǔn)確性，這樣得出的結(jié)果雖好，但卻也失去了檢測(cè)的意義。對(duì)于很多診斷試劑來(lái)說(shuō)，因?yàn)榭紤]到操作簡(jiǎn)便，標(biāo)準(zhǔn)曲線法基本上是一個(gè)被淘汰了的方法。 總膽紅素濃度在171 μmol/L以內(nèi)線性良好，高于此值時(shí)可用生理鹽水將血清稀釋后重測(cè)，結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)，且總膽紅素在10～37℃范圍內(nèi)測(cè)定不受溫度變化的影響，呈色在2 h內(nèi)非常穩(wěn)定。在實(shí)驗(yàn)中雖然都用的是終點(diǎn)法且反應(yīng)原理一樣，但有些帶血清空白，有些又不用帶血清空白。因?yàn)樵谠囼?yàn)前都是要清除試劑空白，血清空白對(duì)結(jié)果到底有怎樣的影響還值得研究。
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