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總膽紅素(T-Bil)的檢驗方法
加入時間：2012-01-09 10:00:00 當前新聞點擊率：32767
人紅細胞的壽命一般為120 d，紅細胞死亡后變成間接膽紅素（I-Bil），經肝臟轉化為直接膽紅素（D-Bil），組成膽汁，排入膽道，最后經大便排出。間接膽紅素與直接膽紅素之和就是總膽紅素（T-Bil）。上述的任何一個環節出現障礙，均可使人發生溶血性黃疸、肝細胞性黃疸和阻塞性黃疸。肝炎患者的黃疸一般為肝細胞性黃疸，也就是說直接膽紅素與間接膽紅素均升高，而淤膽型肝炎的患者以直接膽紅素升高為主。總膽紅素的正常值為1.71～17.1 μmol/L(1～10 mg/L)，直接膽紅素的正常值為1.71～7 μmol/L(1～4 mg/L)。因此，臨床上對于用測定血清總膽紅素來鑒別黃疸有較大意義，它對肝臟疾病診斷、治療和愈后判斷有重要價值。我們對總膽紅素試劑盒中試劑的線性和準確性進行研究，不僅可以有效的節約原材料、降低生產成本、規范行業，對臨床檢驗的準確性，也大有幫助。 實驗原理： 重氮法：總膽紅素在二甲亞砜等加速劑作用下，在酸性溶液中與重氮苯磺酸作用生成紫色的偶氮膽紅素，與經過同樣處理的標準液比較，即可計算出樣品中膽紅素的含量。 試驗方法： 線性關系取總膽紅素（T-Bil）高濃度樣本，通過采用樣品量加倍模式（高值血清低于線性范圍上限時）或用生理鹽水稀釋成一系列濃度，最高濃度應大于或等于標準規定線性范圍上限值（5個試劑盒的加樣量及加樣方法詳見表1~ 5），每個濃度重復測定2次，取其吸光度平均值與對應的理論濃度值進行回歸分析，求相關系數r。 準確性取一定值血清（濃度為24.8 μmol/L的標準液），按線性項下各表中定標的加樣方式和試驗步驟進行測定，重復3次，取其均值計算偏差。然后按以下公式計算各樣品的檢測誤差。 誤差=( 測定值-24.81 /24.8)×100% 結果： 線性 將試劑盒各濃度吸光度均值與其對應的理論濃度回歸，計算回歸系數r值，結果見表6。 準確性 檢測結果如表所示。（略） 總膽紅素標準品很不穩定，根據線性結果來看，雖然相關系數r很好，但吸光度所得值或全部升高或全部降低，即吸光度的增加與其相應的理論濃度不呈正比關系。在有些標準中要求所得值與理論值的偏差應≤10%，如按這一要求來判定線性，總膽紅素的線性就遠遠達不到要求，所以考慮到總膽紅素試劑盒這一特殊性，在標準中不但要求r值，同時還應要求所得值與理論值的偏差。 在分析方法學上，本次試驗采用的是一點定標法。在做線性這一項目檢測時，由于總膽紅素試劑盒中說明書要求的試劑與標準液的比例較低，這就要求必須要用高濃度的標準液來定標和做線性，但如果用高濃度的標準液定標后，再做準確性時，對準確性的結果影響卻非常的大。如果在試驗中用高濃度的標準品定標做線性，再用低濃度的標準液定標做準確性，這樣得出的結果雖好，但卻也失去了檢測的意義。對于很多診斷試劑來說，因為考慮到操作簡便，標準曲線法基本上是一個被淘汰了的方法。 總膽紅素濃度在171 μmol/L以內線性良好，高于此值時可用生理鹽水將血清稀釋后重測，結果乘以稀釋倍數，且總膽紅素在10～37℃范圍內測定不受溫度變化的影響，呈色在2 h內非常穩定。在實驗中雖然都用的是終點法且反應原理一樣，但有些帶血清空白，有些又不用帶血清空白。因為在試驗前都是要清除試劑空白，血清空白對結果到底有怎樣的影響還值得研究。
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