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總膽紅素(T-Bil)的檢驗方法
加入時間:2012-01-09 10:00:00  當前新聞點擊率:32767

       人紅細胞的壽命一般為120 d,紅細胞死亡后變成間接膽紅素(I-Bil),經肝臟轉化為直接膽紅素(D-Bil),組成膽汁,排入膽道,最后經大便排出。間接膽紅素與直接膽紅素之和就是總膽紅素(T-Bil)。上述的任何一個環(huán)節(jié)出現(xiàn)障礙,均可使人發(fā)生溶血性黃疸、肝細胞性黃疸和阻塞性黃疸。肝炎患者的黃疸一般為肝細胞性黃疸,也就是說直接膽紅素與間接膽紅素均升高,而淤膽型肝炎的患者以直接膽紅素升高為主。總膽紅素的正常值為1.71~17.1 μmol/L(1~10 mg/L),直接膽紅素的正常值為1.71~7 μmol/L(1~4 mg/L)。因此,臨床上對于用測定血清總膽紅素來鑒別黃疸有較大意義,它對肝臟疾病診斷、治療和愈后判斷有重要價值。我們對總膽紅素試劑盒中試劑的線性和準確性進行研究,不僅可以有效的節(jié)約原材料、降低生產成本、規(guī)范行業(yè),對臨床檢驗的準確性,也大有幫助。

       實驗原理:

       重氮法:總膽紅素在二甲亞砜等加速劑作用下,在酸性溶液中與重氮苯磺酸作用生成紫色的偶氮膽紅素,與經過同樣處理的標準液比較,即可計算出樣品中膽紅素的含量。

        試驗方法:

        線性關系取總膽紅素(T-Bil)高濃度樣本,通過采用樣品量加倍模式(高值血清低于線性范圍上限時)或用生理鹽水稀釋成一系列濃度,最高濃度應大于或等于標準規(guī)定線性范圍上限值(5個試劑盒的加樣量及加樣方法詳見表1~ 5),每個濃度重復測定2次,取其吸光度平均值與對應的理論濃度值進行回歸分析,求相關系數(shù)r。

        準確性取一定值血清(濃度為24.8 μmol/L的標準液),按線性項下各表中定標的加樣方式和試驗步驟進行測定,重復3次,取其均值計算偏差。然后按以下公式計算各樣品的檢測誤差。

        誤差=( 測定值-24.81 /24.8)×100%

        結果:

        線性 將試劑盒各濃度吸光度均值與其對應的理論濃度回歸,計算回歸系數(shù)r值,結果見表6。

        準確性 檢測結果如表所示。(略)

        總膽紅素標準品很不穩(wěn)定,根據(jù)線性結果來看,雖然相關系數(shù)r很好,但吸光度所得值或全部升高或全部降低,即吸光度的增加與其相應的理論濃度不呈正比關系。在有些標準中要求所得值與理論值的偏差應≤10%,如按這一要求來判定線性,總膽紅素的線性就遠遠達不到要求,所以考慮到總膽紅素試劑盒這一特殊性,在標準中不但要求r值,同時還應要求所得值與理論值的偏差。

  在分析方法學上,本次試驗采用的是一點定標法。在做線性這一項目檢測時,由于總膽紅素試劑盒中說明書要求的試劑與標準液的比例較低,這就要求必須要用高濃度的標準液來定標和做線性,但如果用高濃度的標準液定標后,再做準確性時,對準確性的結果影響卻非常的大。如果在試驗中用高濃度的標準品定標做線性,再用低濃度的標準液定標做準確性,這樣得出的結果雖好,但卻也失去了檢測的意義。對于很多診斷試劑來說,因為考慮到操作簡便,標準曲線法基本上是一個被淘汰了的方法。

  總膽紅素濃度在171 μmol/L以內線性良好,高于此值時可用生理鹽水將血清稀釋后重測,結果乘以稀釋倍數(shù),且總膽紅素在10~37℃范圍內測定不受溫度變化的影響,呈色在2 h內非常穩(wěn)定。在實驗中雖然都用的是終點法且反應原理一樣,但有些帶血清空白,有些又不用帶血清空白。因為在試驗前都是要清除試劑空白,血清空白對結果到底有怎樣的影響還值得研究。

  

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