普朗醫療器械廠家檢驗科學 結核病的細菌學檢查目前是結核病實驗室診斷的金標準。由于痰涂片陽性率較低，鏡檢需要經驗，難以區分環境分枝桿菌造成的假陽性；痰培養需時太長，因此通過體外診斷試劑檢查細菌對結核病的診斷價值有限。

    隨著分子生物學技術的迅速發展，用高度敏感的方法檢測結核菌及其特異性DNA片段，如PCR、生物探針和基因芯片等，需要相應的檢測設備和檢測費用高未能廣泛推廣。血清學診斷技術有其固有的優勢，如操作簡便、快速、便于推廣、無需特殊精密儀器，已有多種純化的特異性抗原可采用，可以發展成自動化檢測，尤其是對痰培養陰性和肺外結核病有較為重要的輔助診斷價值，受到廣泛的重視。本文從靶抗原的選擇和檢測技術的改進等方面綜述了結核病血清學診斷的現狀和進展。

    抗原的選擇

    特異性的抗原是提高血清血液分析儀檢測敏感性、特異性的重要環節。應用于血清學診斷的理想抗原應具有種的特異性及強的免疫原性。尤其是結核分枝桿菌全基因組序列測定以后，單克隆抗體、分子生物學、蛋白質組學和比較基因組學等技術的應用，已獲得多種純化和特異性的診斷抗原。現將當前最受關注的抗原及其臨床評估結果歸納如下：

    1.脂阿拉伯甘露聚糖(LAM)抗原 脂阿拉伯甘露聚糖是分枝桿菌細胞壁的重要組成部分，是屬特異性抗原，具有較強的免疫原性和免疫調節功能，可刺激機體產生相應的抗體，因而是結核病的血清學診斷應用較廣的抗原。有關LAM抗原的應用報道很多, Antunes等用美國生產的結明(MycoDot TM)試劑盒檢測活動性肺結核病人的敏感性為63.0%，特異性為92.4%，認為檢測LAM抗體是結核病一項有效的輔助診斷方法。

    2.A60(antigen 60) A60是從牛分枝桿菌胞漿中提取的一種大分子物質，是脂質蛋白和多糖的復合抗原。Wu等用ELISA法檢測了178例活動性肺結核患者和151例其他疾病患者血清中的IgG A60，根據受試者工作特性曲線(ROC)取261.2單位為截切值(cutoff point)，其敏感性和特異性分別為49.4%和79.5%，認為胸部X片異常的患者結合IgG A60陽性將有助于肺結核病的準確臨床診斷。

    3.結核菌糖脂(TBGL)抗原 結核菌糖脂抗原是分枝桿菌細胞壁上的糖脂類物質，具有菌屬特異性。近年來的研究表明，糖脂類抗原在診斷方面有很大的優勢。Maekura等建立了糖脂類抗原抗體快速檢測方法，并做了臨床評價，對痰涂片陰性的活動性肺結核的靈敏度為56.8％，對痰培養陰性的活動性肺結核的靈敏度為51.2％。將TBGL與核酸擴增方法(NAA)聯合用于檢測，檢出率比兩者單獨使用時進一步提高。Tiwari等用脂質體顆粒作為載體，利用純化的TBGL抗原特異的與結核病患者血清中的TBGL抗體結合，形成藍色凝集顆粒來診斷活動性結核病，其敏感性、特異性分別達94%和98.3%。該方法快速(4min)、經濟，且可以區別活動性肺結核、卡介苗(BCG)免疫接種者與健康人群，可用于人群大規模篩選肺結核病人。

    4.38kDa蛋白 38kDa蛋白是一定位在質膜上的磷酸鹽轉運蛋白，只在分枝桿菌復合體中表達，BCG合成38kDa蛋白的量僅為結核分枝桿菌的十分之一。
38kDa 蛋白為一分泌蛋白，可刺激T細胞和B細胞免疫反應，廣泛應用于結核病的血清學試驗。英國公司生產的OMEGA結核抗體定量檢測Myco G、A、M試劑盒聯合應用38kDa和脂多糖(LPS)抗原，而TB Complex Plus試劑盒選用的是38kDa和16kDa抗原。Butt等對OMEGA試劑盒進行了評價，認為具有種特異性的TB Complex Plus和有屬特異性的Myco M聯合應用可取得最好的效果，檢測肺結核的敏感性和特異性分別為87%和93%。38kDa對活動性肺結核的診斷非常有效，但和大腸埃希菌同源蛋白有 30%以上的交叉，所以對不同人群的靈敏度波動較大，尤其對涂片陰性和合并HIV感染的結核病患者效果較差。

    5.Ag85 抗原85復合體(Ag85)是一組具有較強細胞免疫及體液免疫活性的分枝桿菌分泌性蛋白，分子量約為30～32kDa。分枝桿菌各菌株均可分泌Ag85。結核分枝桿菌Ag85中至少包括三種蛋白成分—Ag85A、Ag85B和Ag85C，其中有免疫作用的主要為Ag85A和Ag85B。Ag85具有分枝菌酸轉移酶的活性，在分枝桿菌細胞壁合成的最后階段發揮必要的作用。它還能和人纖連蛋白(FN)相結合，有助于結核菌入侵宿主細胞。Ag85可能發展成為結核病的血清學診斷抗原。活動性結核病人血清中的Ag85抗體平均水平比其他分枝桿菌疾病患者和健康對照者高50～150倍，可通過檢測血循環中Ag85抗體，對活動性結核加以診斷。Kashyap等用間接ELISA法檢測89%疑似結核性腦膜炎患者腦脊液中存在Ag85抗體，認為檢測Ag85抗體為結核性腦膜炎的早期和確定性診斷提供了一個更靈敏的選擇。

    6.ESAT-6和CFP10 ESAT-6即6kDa早期分泌性抗原靶，是從結核分枝桿菌短期培養濾液中分離純化出的一種低分子量分泌性蛋白，具有較強的細胞免疫活性，在抗結核感染的免疫回憶應答中起重要作用。ESAT-6僅存在于致病性分枝桿菌中，包括人型結核桿菌、牛型結核桿菌、非洲分枝桿菌以及蘇爾加分枝桿菌、海水分枝桿菌和堪薩斯分枝桿菌等非典型分枝桿菌，而BCG及其他非致病性分枝桿菌缺失。CFP-10即培養濾液蛋白10，與ESAT-6位于同一基因簇上，兩者分布相同，都是RDl區編碼的。ESAT-6和CFP10能刺激機體產生特異性IgG，利用ESAT-6和CFP10蛋白抗原能與結核分枝桿菌感染者血中特異性 IgG結合的特點，采用ELISA等方法可特異性區分是真正的結核分枝桿菌感染或是接種BCG后所致敏，該方法明顯優于PPD作包被抗原的ELISA法。陳全等以CFP10-ESAT-6融合蛋白為抗原，用ELISA法檢測豚鼠血清中抗結核分枝桿菌抗體，11份H37Rv感染豚鼠血清全部呈陽性反應，11 份BCG免疫豚鼠血清僅1份呈陽性反應。

    7.U1蛋白 Mukherjee等收集結核分枝桿菌H37Rv株靜脈感染C57BL/6小鼠早期(10～14d) 尿液分離到一種結核抗原，氨基酸測序鑒定后，克隆并表達相應的基因，純化得到可溶的重組蛋白命名為U1蛋白(Urine Protein 1)，分子量大約為16.8kDa。進一步用ELISA法檢測肺結核病人血清中U1抗體的敏感性為60%，檢測合并HIV感染的結核病患者其敏感性為 87%，而正常人血清不與U1蛋白反應。將U1蛋白與Mtb81聯合用于檢測合并HIV感染的結核病患者的敏感性為93.6%。同時檢測了12名HIV感染的非結核病人，其中9名患者血清中無可檢測的U1抗體，另外3名U1抗體的水平處于ELISA法檢測的臨界點。因此認為，檢測U1抗體可增加結核病血清學診斷的敏感性，尤其對合并HIV感染的結核病患者。

    8.其它抗原 Weldingh等在大腸埃希菌中克隆表達了4種超抗原—TB9.7、TB15.3、TB16.3和TB51，并用它們來檢測痰涂片陽性和涂片陰性的結核病人，靈敏度為36%～93%，而特異性超過97%，其中TB16.3最為有效，TB16.3與TB9.7聯合檢測合并HIV感染的結核病患者其敏感性超過85%。Bahk等基因重組表達Rv3369和Rv3874兩個基因，并用它們做抗原檢測結核病患者的敏感性分別為60%、74%, 特異性分別為96%、97%，表明是有價值的結核病血清學診斷抗原。其它抗原，如MPT64、P90、TB4等，也曾被做為快速血清學檢測的侯選抗原加以研究，但大都未達到診斷靈敏度的要求。

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