酶聯(lián)免疫法是目前很常用的免疫學(xué)方法，實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化要求用酶聯(lián)免疫法測(cè)定抗原或抗體時(shí)，不論是定量還是定性都要求使用酶標(biāo)測(cè)定儀進(jìn)行測(cè)定，測(cè)定時(shí)需要選擇單波長(zhǎng)或雙波長(zhǎng)。那你知道如何選擇酶標(biāo)測(cè)定儀的單波長(zhǎng)和雙波長(zhǎng)嗎？

選擇單波長(zhǎng)測(cè)定就是選擇一個(gè)測(cè)定波長(zhǎng)，直接測(cè)定樣本的吸光度，而雙波長(zhǎng)測(cè)量是采用兩個(gè)不同的波長(zhǎng)，即測(cè)定波長(zhǎng)（又叫主波長(zhǎng)）和參比波長(zhǎng)（又叫次波長(zhǎng)）同時(shí)測(cè)定樣品的吸光度，以消除一些外在影響因素，提高酶標(biāo)測(cè)定儀檢測(cè)結(jié)果的精密度和準(zhǔn)確度，但在日常工作中往往忽略對(duì)單波長(zhǎng)和雙波長(zhǎng)的選擇。

酶標(biāo)測(cè)定儀在用單波長(zhǎng)測(cè)定吸光度時(shí)，除受到測(cè)定干擾（樣本的濁度、干擾色等）和電路干擾（包括噪音、漂移、電壓等）等因素外，受液體表面張力的影響也很大。在檢測(cè)過程中，由于液體表面張力的作用，液體的表面不是一個(gè)平面，而是形成一個(gè)凹面，從側(cè)面看似凹透鏡，這樣不可避免會(huì)影響光路的正常通過。由于凹液面的影響，光線在通過液體時(shí)，除正常被液體吸收一部分外，尚有部分被折射和反射（如光線通過凹透鏡那樣），影響吸光度的檢測(cè)。而酶標(biāo)測(cè)定儀使用的又是通過光導(dǎo)纖維傳播的點(diǎn)光源，如果每次能在同一部位檢測(cè)，吸光度的重復(fù)性將得到保證，但由于機(jī)械運(yùn)動(dòng)等造成的誤差，不可能保證每孔都在相同部位被檢測(cè)，因此造成了孔與孔之間有一定的差異。

雙波長(zhǎng)的測(cè)定采用兩個(gè)不同的波長(zhǎng)同時(shí)測(cè)定一個(gè)樣本的吸光度，它們的差值是樣本相對(duì)準(zhǔn)確的吸光度，這樣就大大減少了測(cè)定干擾和電路干擾，因此測(cè)定結(jié)果明顯好轉(zhuǎn)。

在酶聯(lián)免疫法測(cè)定抗原、抗體時(shí)，常用的底物四甲基苯胺或鄰苯二胺，顯色終止后，在630nm處的吸光度值都只有在450nm處吸光度值1%左右，因此利用雙波長(zhǎng)檢測(cè)不會(huì)影響靈敏度，反而可以減少其他因素的影響。

醫(yī)療器械小編建議：酶聯(lián)免疫法比色首要選擇雙波長(zhǎng)，這樣可以提高臨界值附近標(biāo)本結(jié)果判定的準(zhǔn)確度，減少實(shí)驗(yàn)誤差。