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酶標儀檢查瘦肉精操作步驟
加入時間:2011-11-18 10:25:05  當前新聞點擊率:5099

酶標儀檢查瘦肉精操作步驟如下:第一步:所有試劑及樣品在開始檢測前必須回升至室溫(20-24℃),測定操作在20-24℃下進行。

  第二步:用盒中緩沖液以體積1﹕10的比例稀釋實際用量的克侖特羅抗體濃縮液(黑色蓋),稀釋前輕輕混均抗體,不要猛烈振蕩。

  第三步:取出實驗需要數量的微孔板條,足夠標準和樣品所用的數量,標準和樣品做兩個平行試驗,記錄標準和樣品的位置。剩余的微孔板條放進原錫箔袋中并且與提供的干燥劑一起重新密封,置于2-8℃冷藏。

  第四步:每個微孔中底部加100μl稀釋后的抗體溶液,室溫(20-24℃)孵育微孔板15 min,避免光線照射。

  第五步:孵育的同時進行酶標記物的稀釋,用盒中緩沖液以體積1﹕10的比例稀釋實際用量的克侖特羅酶標記物濃縮液(紅色蓋),稀釋前輕輕混均抗體,不要猛烈振蕩,避光放置。

  第六步:洗板,甩出孔中液體,將微孔架倒置在吸水紙上拍打,直到紙上無明顯水跡(拍打3次),以保證完全除去孔中的液體。用250μl蒸餾水充入孔中,再次甩掉微孔中液體,并在吸水紙上拍打,重復操作兩次。加洗滌水的移液器管尖必須置于微孔上方約0.5 cm處打出洗滌水,避免將板孔中的游離抗體帶入洗滌水中。洗板后立即進行下一步操作,不要讓板孔干燥。

  第七步:加入20μl標準或處理好的樣品到各自的微孔底部,標準和樣品做兩個平行實驗。

  第八步:加入100μl稀釋了的酶標記物至微孔底部,輕輕震蕩微孔析并在桌面上作圓周運動以混勻。移液器管尖不要接觸到孔中的混合物,避免交叉污染。

第九步:室溫孵育微孔板30 min,避免放置,盡可能每隔10 min輕輕振蕩1次,準備好酶基質/發色劑,并注意避光放置。

  第十步:洗板,同第六步。在洗板過程中加洗滌水的移液器置于微孔板上方0.5 cm處打出洗滌水,避免將板孔中的游離酶標記物帶入洗滌水中。

  第十一步:不要讓板孔干燥,迅速加入100μl酶基質/發色劑到每個孔中,步驟操作要迅速,避免頭尾反應時間相差過長,輕輕振蕩板并在桌面上作圓周運動以混勻。移液器管尖不要接觸微孔中的混合物,避免交叉污染。

  第十二步:室溫暗處孵育微孔板15 min,暗處避光放置,同時準備好反應停止液。

  第十三步:每孔加入100μl反應停止液,混勻,60 min內用酶標儀測量450 nm處波長吸光度值。

  八、結果

  所獲得的標準和樣品吸光度值的平均值除以第一個標準(0標準)的吸光度值再乘以100,并且以百分比的形式給出吸光度值。

  吸光度值(%)= ×100

  計算的標準值(吸光度值)繪成一個對應克侖特羅濃度(mg/kg)的半對數坐標系統曲線圖,校正曲線在200-2000 ng/kg范圍內應當成為線性。相對應每一個樣品的濃度(ng/kg)可以從校正曲線上讀出

本文由酶標儀生產廠家普朗醫療網編發表,轉載請注明出處!

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