通過血液分析儀準確計數血小板的基本方法介紹
加入時間:2011-12-15 09:18:13 當前新聞點擊率:4739
普朗醫療器械公司知識——由于近些年,如何利用血液分析儀對外周血的血小板進行準確計數已經成為了業界的討論焦點和研究對象。專家也在不斷的探究新的方法和計數。然而就目前而言,最為主要和普遍的方法就是免疫學測定法和二維激光散射法。 1.免疫學測定法 本法早在1988年即由Aulter提出,但最近幾年才深入研究并見諸實用。Dickerhoff(1995)和Matzdorff(1998)應用熒光標記抗血小板膜糖蛋白抗體,用FCM法計數血小板;Davis(1999),Gill(2000)和Harrison(2000)等進一步完善了這一方 法。所用的單抗,早期是抗CD41或CD42b,近來多用抗CD61,三種單抗效果相同。FCM方法都比較復雜,一般是先在流式血球儀上計數著染熒光的血 小板和計數紅細胞,先求出血小板/紅細胞之比值(下稱血小板比率),再用普通血液細胞分析儀計數同一患者的紅細胞數。然后以血小板比率×紅細胞數=血小板數。 Dickerhoff則改用已知其濃度的熒光微球代替紅細胞,先求出血小板/熒光微球之比值,再乘以熒光微球的濃度,即得到血小板數。上述方法都比較麻 煩,熒光微球價格高昂,難以在常規作中推廣使用。為此,Gill等改在Abbott公司的CELL-DYN4000型血液分析儀上,直接計數著熒光的血小 板,完全省去FCM法要先求血小板比率的步驟。由于用的是現成的儀器,而一般的血液分析儀,都已有一套成熟的操作、校準和質控系統,故計數結果比較準確, 可用于常規工作。 本法是最近幾年由Bayer公司研制的Advia 120型血液分析儀首先推出的。其設計原理是:根據同質性球體光散射的Mie理論(Mie theory of light scatter for homogenenous spheres),當球形化的血小板一個一個地通過激光照射區時,在兩個角度進行測定:高角度(5°-15°)主要測細胞折射指數(refractive index,簡稱RI),它與細胞的密度有關:低角度(2°-3°),主要是測細胞的大小。血小的體積在1-30fL,RI在1.35-1.40之間。由 于紅細胞含有高濃度的血紅蛋白,其折射指數高(Ri可達1.44),故大血小板雖然可能與小紅細胞、紅細胞碎片、紅細胞殘骸(ghost)以及其它細胞碎 片的體積相似,但因為容物不同,RI相差較大,因二維散圖上可區別并分別計數。此法無需熒光標記的抗體。也沒有繁瑣的預處理步驟,可以隨常規工作與其它血 細胞計數同進進行,使用十分方便。我們已應用于實際工作中,效果甚好。 文章來源--普朗醫療器械公司網編發表,轉載請注明出處。 |