DNA測序原理和方法
加入時間:2014-03-03 16:09:18 當前新聞點擊率:2816
DNA測序是一項廣泛應用于高端體檢、產前診斷等領域的技術,影星安吉麗娜·朱莉、蘋果公司創始人史蒂夫·喬布斯都曾接受過DNA測序,而前不久兩部委卻叫停基因測序相關技術及產品,這一舉措引發了廣泛的社會關注。但是還是有很多人對DNA測序原理和方法都不太明白,為此我們請南京普東興技術顧問陸主任為大家答疑解惑。
DNA測序方法有很多種,如Sanger雙脫氧鏈終止法、化學降解法、自動化測序法等等。
Sanger雙脫氧鏈終止法原理:測序過程需要先做一個聚合酶連鎖反應(PCR)。PCR過程中,雙脫氧核糖核苷酸可能隨機的被加入到正在合成中的DNA片段里。由于雙脫氧核糖核苷酸多脫了一個氧原子,一旦它被加入到DNA鏈上,這個DNA鏈就不能繼續增加長度。最終的結果是獲得所有可能獲得的、不同長度的DNA片段。目前最普遍最先進的方法,是將雙脫氧核糖核苷酸進行不同熒光標記。將PCR反應獲得的總DNA通過毛細管電泳分離,跑到最末端的DNA就可以在激光的作用下發出熒光。由于ddATP,ddGTP,ddCTP,ddTTP熒光標記不同,計算機可以自動根據顏色判斷該位置上堿基究竟是A,T,G,C中的哪一個。
化學修飾法測序原理:將一個DNA片段的5'端磷酸基作放射性標記,再分別采用不同的化學方法修飾和裂解特定堿基,從而產生一系列長度不一而5'端被標記的DNA片段,這些以特定堿基結尾的片段群通過凝膠電泳分離,再經放射線自顯影,確定各片段末端堿基,從而得出目的DNA的堿基序列。
自動化測序法原理:與鏈終止法測序原理相同,只是用不同的熒光色彩標記ddNTP,如ddATP標記紅色熒光,ddCTP標記藍色熒光,ddGTP標記黃色熒光,ddTTP標記綠色熒光.由于每種ddNTP帶有各自特定的熒光顏色,而簡化為由1個泳道同時判讀4種堿基. |