血細胞分析儀發展中的技術進步

    隨著各種技術的不斷進步以及實驗室工作對儀器設備需求的不斷增加， 血液細胞分析儀的各項用途和用法也有不斷的進展，這首先體現在儀器應用的方便性、準確性和盡可能增加的參數上。

1、稀釋技術的進步： 早期的儀器一般要求在測定前先進行人工稀釋，因此許多操作要求直接取20～40ul 的末梢血加到稀釋液中。白細胞稀釋比例多在1：251 和1： 501倍，紅細胞則需要進行二次稀釋， 稀釋倍數在6.25～25萬倍之間， 然后再將稀釋好的標本放入計數杯內進行計數，而且需要在白細胞稀釋懸液中加入溶血劑。由于人工稀釋費時費力且精確性差，隨后的一些血細胞計數儀增加配置了專用的稀釋器， 專供該型號的儀器進行機外稀釋，這樣減少了人工稀釋帶來的誤差和麻煩，提高了效率。這類儀器的典型例子有國內應用非常普遍，目前仍有市場需求并在廣泛使用。現代的血球儀則更加先進，已經將自動稀釋技術，自動進樣方式全部添加到儀器本體內，即提高了技術含量、取樣和稀釋的精確度，使得進樣的速度和可操作性更加方便，同時使得檢測速度加快。

2、分析參數的增加：前面談到早期的血球計數儀僅能進行紅白細胞計數， 而且是需要通過切換分別進行紅白細胞得計數， 所以將其稱為血細胞計數器是恰當得。由于血常規檢驗對血紅蛋白測定的需求增加，沙利比色法由于精度和操作不便不能滿足臨床需求，已經有單獨的血紅蛋白比色計配備，將加入專用的溶血劑后的樣本進行白細胞計數后再將其倒入血紅蛋白比色計， 即可得到比色法測定的血紅蛋白結果。此時期國內使用最多的血細胞計數儀是Coulter ZF 型和血紅蛋白計。由于對血紅蛋白測定要求的增加，因此在儀器內增加一套比色裝置，就可方便的測定血紅蛋白。電阻法定細胞數量的同時還可對細胞體積進行測定，因此對紅細胞平均體積（MCV）、紅細胞壓積（HCT）、平均紅細胞血紅蛋白量（MCH）、平均紅細胞血紅蛋白濃度（MCHC）測定和計算也成為血球計數儀的標準參數。1975 年日本東亞公司（TOA， Sysmex 的前身） 推出了包含以上7 個參數的全自動血細胞計數儀器CC－710 和CC －720 型。

3、血小板計數功能的增加：血小板是血細胞中最小的粒子，早期的血細胞計數儀均不包含血小板計數。60 年代起國外開始研制血小板計數儀，70 年已經有比較成熟的產品，這類儀器一般需使用PRP 血漿進行， 即使用特殊的離心速度將紅細胞和白細胞進行沉淀，使上層血漿中盡量保存最為豐富的血小板，然后應用這種PRP 血漿進行血小板計數，例如Sysmex PA-701 型和CONTRAVE 1000 型，此類儀器多配有專用PRP 離心機（圖6 為TOA PLT-100 型血小板計數儀和離心機）。使用全血方式和水動力聚集方式計數血小板的儀器如Clay-Adams 的Ultra-Flo100 型以及80 年代后出現在我國的Baker S-810 型血小板分析儀（圖7 為作者15 年前應用Baker S-810 型血小板分析儀的工作照片），該儀器設定了單獨血小板分析測量通道，根據紅細胞和血小板體積的顯著差異他們區分開（圖8），將血小板按體積大小劃分到64 個通道，分別累加體積大小不同的血小板數量。它通過直接吸入稀釋好的血細胞懸液進行測定，除了給出血小板數量外，還提供了兩個新的參數，平均血小板體積(MPV) 和血小板體積分布寬度（PDW）。在這之后血細胞分析儀將血小板計數這一重要功能合并到全血細胞計數（CBC） 范圍內。當時的儀器有很多型號，例如Baker 8000, Sysmex CC-800,Coulter S 系列和T 系列等。

3、定量部的改進：儀器為了準確進行細胞計數，除了要準確稀釋血液外， 對直接進入計數小孔內的液體量也要進行定量控制，因此儀器對定量部的要求是非常嚴格的。在血細胞計數儀開始階段， 人們設計了U型水銀管壓力計，通過水銀的重量和在兩個電極間的距離來控制吸入的標本量。后來人們通過兩只光電管來了解液體通過一個固定距離所需要的時間和容積來控制標本的吸入量，還有一些公司設計并使用了微量注射器技術以及浮球定量技術來控制計數樣本的量。最新的光電計時容量控制技術控制標本進入計數區的量，可以使得進入計數區域的細胞懸液定量更加準確和無污染、同時還可判斷小孔是否出現堵塞或半堵塞問題，以及便于維護。

4、自動取樣技術： 由于儀器需要對全血進行自動取樣和稀釋， 因此取樣量也同樣需要精確控制。最初的儀器是需要進行手工取樣和稀釋的，后來逐漸有了外置式專用取樣稀釋器。再后來儀器內部設置了內置式負壓取樣稀釋器，根據負壓量的大小來吸取血液樣品，這對控制負壓的精確度要求很高，此外還有微量注射器取樣技術，依靠光電管控制血液取樣量的技術等。目前認為采用旋轉閥取樣技術是比較精確的方法，旋轉伐內部有多個按一定體積設計的小孔，當血液進而后，旋轉伐從吸入的小孔轉向排出的小孔，此時血液不能再進入，而孔內保留的固定量的血液進入儀器的稀釋部，然后清洗，再進入下一次循環。目前許多更加先進的血液分析儀均采用陶瓷制的旋轉閥來分配血液標本。

進樣方式也從最初的單一預稀釋方式，演化為預稀釋和全血方式兩者兼有。現在許多先進的五分類血液分析儀還采用了更多種進樣方式，如末梢血方式、開蓋手工進樣、閉蓋手工進樣、急診檢驗進樣、全自動進樣等方式以及連接到全自動流水線的自動進樣技術等。進樣設備有的采用旋轉式進樣盤，這種旋轉式進樣器多是選配件。更多的血液細胞分析儀采用了平推式的自動進樣系統，即將待檢樣品插在專用試管架上，儀器將試管架一步步送入儀器的取樣口，測定完畢后自動推出。平推式自動進樣系統在有些廠家的儀器上是可選擇的配件，而在某些儀器上則是必備件。

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